服務(wù)簡(jiǎn)介
單克隆抗體是由激活的B淋巴細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞融合而成的單克隆雜交瘤細(xì)胞產(chǎn)生的。小鼠單克隆抗體是常見的單克隆抗體。同時(shí)小鼠也是生物學(xué)和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中常見的模式動(dòng)物之一。
抗體主要由B淋巴細(xì)胞合成。每個(gè)B淋巴細(xì)胞有合成一種抗體的遺傳基因。動(dòng)物脾臟內(nèi)有上百萬種不同的B淋巴細(xì)胞系，含遺傳基因不同的B淋巴細(xì)胞可以合成不同的抗體。當(dāng)機(jī)體受外界抗原刺激后，可誘發(fā)免疫反應(yīng)，產(chǎn)生相應(yīng)的抗體，即單克隆抗體。B淋巴細(xì)胞能夠產(chǎn)生抗體，但在體外不能進(jìn)行無限分裂，而腫瘤細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下可以無限傳代，是“永久”的細(xì)胞，但不能產(chǎn)生抗體。因此將骨髓瘤細(xì)胞與經(jīng)免疫過的小鼠的脾細(xì)胞在聚乙二醇等介導(dǎo)下發(fā)生融合，融合后的雜交瘤細(xì)胞具有兩種親本細(xì)胞的特性，一方面可以分泌特定的抗體，另一方面也具備了腫瘤細(xì)胞無限增殖的能力，可在體外培養(yǎng)條件下或移植到體內(nèi)無限增殖，從而分泌大量單克隆抗體。
百歐泰多年來致力于抗體制備研究。我們擁有經(jīng)驗(yàn)豐富的抗體制備技術(shù)人員，積累了充足的抗體定制和重組蛋白生產(chǎn)經(jīng)驗(yàn)，能夠?yàn)榭蛻籼峁┌ㄍ迷?，鼠源，駝源，羊源，雞源及鯊魚類等不同物種的重組單克隆抗體制備服務(wù)。依托于抗體平臺(tái)、蛋白平臺(tái)等完善的平臺(tái)體系建設(shè)，提供一站式技術(shù)服務(wù)。包括抗原設(shè)計(jì)、抗體修飾、DNA合成、質(zhì)粒構(gòu)建、蛋白表達(dá)、蛋白純化、蛋白修飾、多肽合成、多肽修飾、多肽與載體蛋白交聯(lián)、小分子結(jié)構(gòu)分析及與載體蛋白交聯(lián)等。如客戶需要，我們還提供抗體提純及抗體鑒定服務(wù)。
鼠單克隆抗體制備
樣品要求
客戶提供制備抗體所需蛋白或多肽片段，抗原純度＞85%，數(shù)量＞10 mg，濃度＞1 mg/ml。若抗原為小分子多肽和化合物等半抗原，在免疫前需偶聯(lián)載體蛋白，載體類型包括BSA, KLH, HRP, OVA。
客戶提供的抗原信息應(yīng)包含蛋白抗原的英文全稱、種屬信息、GeneID 核酸序列或氨基酸序列信息；化合物抗原應(yīng)提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式、活性基團(tuán)、溶解性等信息。
請(qǐng)?zhí)崆罢f明樣品來源、生物危害以及其他特殊情況。
鼠單克隆抗體制備
百歐泰能夠?yàn)榭蛻籼峁┦髥慰寺】贵w制備服務(wù)，利用細(xì)胞融合技術(shù)制備雜交瘤細(xì)胞系。由骨髓瘤細(xì)胞和分泌抗體的B淋巴細(xì)胞融合（全人源單克隆抗體制備技術(shù)除外）后形成雜交瘤細(xì)胞并分泌單克隆抗體，由于其只作用于抗原復(fù)合分子上某一抗原決定簇，因此具有專一性強(qiáng)、效價(jià)高等特點(diǎn)。
免疫動(dòng)物
免疫動(dòng)物是用目的抗原免疫小鼠，使小鼠產(chǎn)生致敏B淋巴細(xì)胞的過程。選用6-8周齡Balb/c健康雌性小鼠，按照預(yù)先指定的免疫方案進(jìn)行免疫注射?？乖ㄟ^血液循環(huán)或淋巴循環(huán)進(jìn)入外周免疫器官，刺激相應(yīng)B淋巴細(xì)胞克隆，使其活化、增殖，并分化成為致敏B淋巴細(xì)胞。（抗血清制備-免疫動(dòng)物）
細(xì)胞融合、篩選和亞克隆
選取血清效價(jià)滿足要求的小鼠脾細(xì)胞與小鼠骨髓瘤細(xì)胞融合，有限稀釋融合細(xì)胞，進(jìn)行克隆化，HAT篩選雜交瘤細(xì)胞，經(jīng)免疫原檢測(cè)，挑選陽(yáng)性克隆，進(jìn)行亞克隆擴(kuò)大培養(yǎng)，ELISA篩選陽(yáng)性亞克隆，并進(jìn)行擴(kuò)大培養(yǎng)，小鼠經(jīng)過融合、有限稀釋法的一次克隆及上清檢測(cè)，得到多株符合項(xiàng)目要求的細(xì)胞株，選擇其中的細(xì)胞株進(jìn)行后續(xù)腹水制備。
單克隆抗體的大量制備
(1) 動(dòng)物體內(nèi)誘生法
取Balb/c小鼠，腹腔注射降植烷或液體石蠟進(jìn)行預(yù)處理。腹腔注射接種雜交瘤細(xì)胞。待小鼠腹部膨大。用注射器抽取腹水，即可獲得大量單克隆抗體。
(2) 體外培養(yǎng)法
體外使用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)管大量培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞。從上清液中獲取單克隆抗體，通過離心，去除細(xì)胞及其碎片，即可獲得單克隆抗體。
單克隆抗體純化
對(duì)于腹水通過采用二氧化硅吸附法和過濾離心法，除去細(xì)胞及其殘?jiān)?、小顆粒物質(zhì)、以及脂肪滴。對(duì)于體外培養(yǎng)雜交瘤細(xì)胞，從上清液中獲取單克隆抗體，通過離心，去除細(xì)胞及其碎片，即可獲得單克隆抗體。
抗體提?。喝∮枚趸栉椒ā⒘蛩徜@沉淀法、辛酸-硫酸銨沉淀法、凝膠過濾、親和層析、離子交換層析等方法。
抗體鑒定：ELISA檢測(cè)、SDS-PAGE、Western Blot等方法進(jìn)行鑒定。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
保證較高的成功率與快速交付速度；
豐富的抗體表達(dá)載體資源，嚴(yán)格的質(zhì)控體系，GMP級(jí)的操作水平，保證結(jié)果可靠；
高抗體效價(jià)： 制備得到高效價(jià)和高靈敏度的豚鼠單抗，保證交付量，滿足實(shí)驗(yàn)需求；
服務(wù)為主：價(jià)格合理，可根據(jù)客戶需求綜合分析，為客戶提供滿意的結(jié)果；
專業(yè)的技術(shù)支持，保障強(qiáng)力、周到及時(shí)的售前售后服務(wù)支持，隨時(shí)為您解答出現(xiàn)的問題；
完整的上下游服務(wù)：提供從抗體制備、抗體測(cè)序，抗體標(biāo)記修飾一站式技術(shù)服務(wù)，節(jié)約客戶寶貴時(shí)間和經(jīng)費(fèi)。
服務(wù)流程
雙方溝通一致后確定實(shí)驗(yàn)方案，確定服務(wù)要求-簽訂合同—預(yù)付款-開始實(shí)驗(yàn)-成果交付
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