百歐泰生物建立了蛋白分析技術(shù)平臺(tái)，可以對(duì)各種蛋白質(zhì)進(jìn)行測(cè)序。技術(shù)人員可以對(duì)各種蛋白質(zhì)進(jìn)行解析，得到其圖譜，并利用拼接軟件得到未知序列。常用的蛋白質(zhì)測(cè)序方法是質(zhì)譜分析和Edman降解法，客戶可以在2-4周左右得到蛋白的全長(zhǎng)序列。此外，我們可以為客戶提供肽段覆蓋率檢測(cè)服務(wù)和蛋白質(zhì)定量服務(wù)，肽段覆蓋率檢測(cè)可以利用酶切鑒定、Orbitrap LC-MS/MS樣品分析、數(shù)據(jù)比對(duì)，確認(rèn)蛋白質(zhì)的序列一致性程度；蛋白質(zhì)定量服務(wù)包括標(biāo)記定量技術(shù)（，iTRAQ/TMT技術(shù)）和非標(biāo)記定量技術(shù)，可用于研究不同條件下或者不同階段的組織樣品中蛋白質(zhì)表達(dá)水平的差異。
該方法主要用于順序分析。它的原理是從N端開始，逐步降解。將肽先與PTH試劑在pH8-9條件下作用，肽的NH2末端接到異硫qin酸苯酯的C原子上生成苯異硫X甲氨酰肽，簡(jiǎn)稱PTC肽，在強(qiáng)酸作用下，可使靠近PTC基的氨基酸環(huán)化，肽鍵斷裂形成苯氨基噻唑啉酮衍生物和一個(gè)失去末端氨基酸的肽鏈。此肽不被破壞，因而又可出現(xiàn)一個(gè)新的N-末端。重復(fù)以上的步驟，繼續(xù)與PTH試劑作用，繼續(xù)分析，苯氨基噻唑啉酮衍生物很容易由有機(jī)溶劑抽提出來(lái)進(jìn)行鑒定。 Edman降解法的優(yōu)點(diǎn)是樣品用量少，靈敏度高。
實(shí)驗(yàn)要求：蛋白N端測(cè)序，要求純度很高的蛋白，可通過(guò)SDS-page膠考染判定。如果蛋白是復(fù)合物，可以通過(guò)跑SDS-PAGE膠分離蛋白，再PVDF轉(zhuǎn)膜，考染染膜。提供PVDF膜進(jìn)行測(cè)序，將通過(guò)剪切特異的PVDF膜染色條帶進(jìn)行測(cè)序。
在基于MS的測(cè)序中，蛋白質(zhì)被消化酶預(yù)處理消化成小片段，然后用質(zhì)譜儀分析。由于大多數(shù)氨基酸殘基的質(zhì)量不同，不同的肽段可以產(chǎn)生有不同m/z和不同譜圖的碎片離子。質(zhì)譜法可以用于N端測(cè)序和C端測(cè)序。該方法優(yōu)點(diǎn)：能獲取更長(zhǎng)的N端序列信息；可分析N端封閉和PTMs。MS測(cè)序可以通過(guò)高分辨率質(zhì)譜分析N端封閉和翻譯后修飾(PTMs)，可通過(guò)使用兩種或三種不同蛋白酶的組合來(lái)增加序列的覆蓋率。
實(shí)驗(yàn)要求：凝膠和液體蛋白樣品均可以接受，樣品純度應(yīng)盡可能高。質(zhì)譜分析是一項(xiàng)非常靈敏的技術(shù)，因此樣品必須仔細(xì)準(zhǔn)備，應(yīng)消除任何可能引入污染蛋白質(zhì)的來(lái)源。
iTRAQ和TMT都是等重同位素標(biāo)簽，這兩種標(biāo)簽標(biāo)記肽段的原理是一樣的，因此使用iTRAQ和TMT標(biāo)簽定量蛋白是屬于同一類定量方法。iTRAQ標(biāo)簽與TMT標(biāo)簽都由報(bào)告基團(tuán)、平衡基團(tuán)以及肽反應(yīng)基團(tuán)組成，報(bào)告基團(tuán)和平衡基團(tuán)通過(guò)加入同位素分子的量和種類來(lái)調(diào)節(jié)重量，每種標(biāo)簽的報(bào)告基團(tuán)和平衡基團(tuán)的總重量是一定的，這就構(gòu)成了等重標(biāo)簽。
適用范圍：可檢測(cè)到的蛋白除了胞漿蛋白外，還有線粒體蛋白、膜蛋白和核蛋白。也能對(duì)任何類型的蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定，包括高分子量，酸性，堿性蛋白質(zhì)，可以實(shí)現(xiàn)多個(gè)樣品的定性定量分析，特別適用于采用多種處理方式或來(lái)自多個(gè)處理時(shí)間的樣本的差異蛋白分析。
蛋白質(zhì)非標(biāo)記定量技術(shù)（label-free）是通過(guò)液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)蛋白質(zhì)酶解肽段進(jìn)行質(zhì)譜分析，不需要穩(wěn)定同位素標(biāo)記樣本，每個(gè)樣本分別上機(jī)檢測(cè)。由于不需要對(duì)樣本進(jìn)行標(biāo)記，蛋白非標(biāo)記定量分析技術(shù)成本較低，并且對(duì)一次檢測(cè)的樣本量無(wú)限制，可同時(shí)比較多個(gè)樣本的蛋白質(zhì)表達(dá)差異。
適用范圍：不同處理、不同生理/病理狀態(tài)下樣本中的蛋白質(zhì)表達(dá)變化；蛋白DIA定量技術(shù)特別適合大樣本量的蛋白質(zhì)研究。
序列覆蓋率是指通過(guò)LC-MS確證蛋白質(zhì)氨基酸序列和理論序列的一致性匹配程度，主要是針對(duì)蛋白序列的確認(rèn)。百歐泰生物在蛋白鑒定過(guò)程中一般會(huì)使用兩種不同的酶（如trypsin和chymotrypsin）對(duì)靶蛋白進(jìn)行酶切和鑒定，結(jié)合 LC-MS/MS對(duì)酶解產(chǎn)物進(jìn)行質(zhì)譜分析，以達(dá)到較高的覆蓋率。我們采用的蛋白分子識(shí)別系統(tǒng)具有較高的識(shí)別率，也大大縮短了分析周期。
實(shí)驗(yàn)要求：蛋白樣品量>50μg，純度>85%
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
制定個(gè)性化的實(shí)驗(yàn)方案
高通量定性定量能力
檢測(cè)項(xiàng)目的覆蓋范圍廣
專業(yè)的檢測(cè)及分析能力
嚴(yán)格的質(zhì)量控制體系
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