服務(wù)編號:BIOFW067
服務(wù)簡介
幾乎所有的蛋白質(zhì)合成都起始于N-端,蛋白質(zhì)N-端的序列組成對于蛋白質(zhì)整體的生物學(xué)功能有著巨大的影響力。例如N-端序列影響蛋白質(zhì)的半衰期,同時關(guān)聯(lián)著蛋白亞細胞器定位等,這些與蛋白的功能和穩(wěn)定性息息相關(guān),對蛋白進行N-端測序分析,有利于幫助分析蛋白質(zhì)的高級結(jié)構(gòu),揭示蛋白質(zhì)的生物學(xué)功能。
對蛋白N端測序主要分類兩大類,其一為非質(zhì)譜技術(shù),其二為質(zhì)譜技術(shù)。各自都有其使用的長處和制約之處。蛋白質(zhì)和多肽N-端測序技術(shù)是以Edman化學(xué)降解法為基礎(chǔ)的。Edman化學(xué)降解是測定蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)的方法主要是從蛋白質(zhì)或多肽氨基酸末端進行分析,其基本原理是包括通過異硫氰酸苯脂與蛋白質(zhì)和多肽的N-端殘基的偶聯(lián),苯氨基硫甲酰酞(PTC-肽)環(huán)化裂解,和噻唑呤酮苯氨(ATZ)轉(zhuǎn)化為苯異硫尿氨基酸(PTH-氨基酸)三個主要的化學(xué)步驟,每個循環(huán)從蛋白質(zhì)與多肽裂解一個氨基酸殘基,同時暴露出新的游離的氨基酸進行下一個Edman降解,而后通過轉(zhuǎn)移的PTH-氨基酸鑒定實現(xiàn)蛋白質(zhì)序列的測定。
百歐泰擁有多年的蛋白組學(xué)研究經(jīng)驗,同時擁有經(jīng)驗豐富的技術(shù)人員,優(yōu)質(zhì)的測序儀器,應(yīng)用現(xiàn)有的質(zhì)譜技術(shù)平臺,可以提供高質(zhì)量的蛋白質(zhì)N端測序服務(wù)。采用完善Edman測序系統(tǒng),為廣大科研工作者和科研客戶提供純化后蛋白產(chǎn)物、蛋白品、抗體以及蛋白疫苗的N端測序服務(wù)。我們的不斷自我完善測序系統(tǒng)體系,通過Edman降解法可以確保精準測定N端多個氨基酸的序列信息。
蛋白質(zhì)N端測序服務(wù)--Edman法
Edman法測定單個氨基酸循環(huán)包括3步:第一步是在堿性條件下,PITC與蛋白N端的游離氨基結(jié)合;第二步是在酸性溶液中,N端殘基被切除;第三步是PITC結(jié)合的殘基轉(zhuǎn)化成為更為穩(wěn)定的PTH殘基,經(jīng)過在線的HPLC分析,根據(jù)洗脫時間來確定氨基酸種類。
測序步驟:蛋白樣品一般先進行SDS-PAGE的分離,保證樣品的純度滿足測序的要求;隨后將SDS-PAGE上的蛋白樣品轉(zhuǎn)移到PVDF膜上;經(jīng)過染色確定把蛋白條帶并切出;Edman測序儀對得到的PVDF膜上的蛋白樣品進行分析。

樣品要求
客戶提供 | 要求 |
PVDF轉(zhuǎn)膜樣品 | 具體轉(zhuǎn)膜條件請參照附件,請使用PVDF膜,不要用硝酸纖維素膜(NC膜),考馬斯亮藍R250或麗春紅染色 |
蛋白凍干粉 | 純度大于95%則不需要轉(zhuǎn)膜,樣品緩沖液需要不含鹽,提供20-60ug |
天然純化多肽樣品 | HPLC純度>95%,提供約100ug |
服務(wù)優(yōu)勢
蛋白表達及pulldown產(chǎn)物的鑒定:重組蛋白氨基酸順序驗證以及各種免疫沉淀蛋白產(chǎn)物的驗證
細胞株表達產(chǎn)物的驗證:驗證細胞株建立和發(fā)酵過程中蛋白產(chǎn)物N端甲硫氨酸和信號肽是否正確處理
超長氨基酸檢測:蛋白質(zhì)N端長達67個氨基酸測序
抗體藥物N端序列驗證
天然提取,分離純化的小分子多肽序列鑒定
實驗周期快:2-3周

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